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河北省治疗前人群耐药毒株分子传播网络研究
作者:网站采编关键词:
摘要：ORCID：0000-0003-4613-2028 高效抗逆转录病毒治疗(Highly active anti-retrovirus therapy, HARRT)可以有效抑制HIV病毒的复制，从而降低HIV感染者/艾滋病患者体内病毒载量，使机体免疫能力得到恢复或部
ORCID：0000-0003-4613-2028
高效抗逆转录病毒治疗(Highly active anti-retrovirus therapy, HARRT)可以有效抑制HIV病毒的复制，从而降低HIV感染者/艾滋病患者体内病毒载量，使机体免疫能力得到恢复或部分恢复，因此HARRT可以作为预防HIV病毒传播的有效手段[1]，但随着发现即治政策的实施，HARRT范围进一步扩大，HIV-1耐药基因突变已成为治疗效果下降的主要原因[2]。因此加强对抗病毒治疗前人群的HIV-1耐药监测，可以为阻断HIV-1耐药株的传播提供早期预警，并对监控HIV-1耐药毒株传播规律具有重要社会意义。本研究对河北省2018年上半年抗病毒治疗前人群开展了HIV-1耐药毒株流行情况横断面调查，为本省预防HIV-1耐药毒株传播及建立有效耐药预警机制提供参考依据。
1 资料与方法
1.1研究对象 河北省辖区内2018年1月至6月新诊断报告的HIV-1感染者。入组标准为：年龄≥18岁、均未参加抗病毒治疗、本省籍、已提供知情同意书。
1.2研究方法
1.2.1样本采集 使用EDTA抗凝采血管采集研究对象的外周静脉血10 mL，24 h内离心分离血浆，-70 ℃保存备用。同时，收集包括人口学信息、感染途径等流行病学信息。
1.2.2目的基因片段扩增 采用QIAsymphony SP全自动核酸提取仪提取血浆HIV-1 RNA，通过In-house法扩增HIV-1pol区基因(1.3 kb)，对应国际标准参考株HXB2的位置为2253-3553b。第一轮RT-PCR外引物扩增以RNA为模板，使用F1a(5′-TGAARGAITGYACTGARAGRCAGGCTAAT-3′, HXB2:2057-2085)和RT-R1(5′- ATCCCTGCATAAATCTGACTTGC-3′， HXB2:3370-3348)引物，按照TaKaRa One Step RNA PCR Kit说明书要求配置反应体系和设置反应条件。第二轮PCR扩增以外引物扩增产物的1∶10稀释液作为模板，以F2(5′-CTTTARCTTCCCTCARATCACTCT-3′, HXB2:2243-2266)和R2(5′-CTTCTGTATGTCATTGACAGTCC-3′, HXB2: 3326-3304)为引物，按照TaKaRaTaq说明书配制反应体系和设置反应条件。扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，将扩增阳性产物送上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。
1.2.3序列分析 用软件对原始反应序列进行校对和拼接，用软件进行序列比对和整理。使用MEGA 6.0软件构建N-J (Neighbor-joining)系统进化树(bootstrap设定为1000，校验值≥70%判定为同一亚型)；将目的基因序列提交斯坦福大学HIV耐药数据库(
1.2.4统计学分析 利用SAS 9.2软件进行多因素Logistic回归分析，探讨HIV-1耐药相关影响因素。
2 结 果
2.1流行病学特征 在获得目的基因序列的276例HIV-1感染者中，以18～49岁(84.4%，233/276)、男性(94.2%，260/276)、已婚(47.8%，132/276)、汉族(97.1%，268/276)、初高中及中专文化学历(63.0%，174/276)，同性性传播途径(75.0%，207/276)为主；CRF01_AE是最主要基因型，占49.6%(137/276)，其次是CRF07_BC(29.7%，82/276)、B(9.8%，27/276)、URFs(4.3%，12/276)、CRF55_01B(2.9%，8/276)、CRF08_BC(1.1%，3/276)、CRF68_01B(1.1%，3/276)、CRF65_cpx(1.1%，3/276)和CRF80_0107(0.4%，1/276)。URFs重组模式包括URF_01B(2.9%，8/276)、URF_01C(0.3%，1/276)、未知(1.1%，3/276)。
2.2耐药位点及耐药程度分析 HIV-1耐药率为6.16%(17/276)。其中，NRTI类耐药率为0.36%(1/276)，出现耐药的位点为L74I，对阿巴卡韦(ABC)中度耐药、去羟基苷(DDI)高度耐药；NNRTI类耐药率为4.35%(12/276)，其中有5例携带耐药位点K103R/V179D，导致依非韦伦(EFV)、奈韦拉平(NVP)中度耐药，利匹韦林(RPV)低度耐药；有2例研究对象对EFV、NVP产生高度耐药；PI类耐药率为1.09%(3/276)，耐药突变为M16I/L，对奈非那韦(NFV)产生耐药；NNRTI及PI类药物的双重耐药率为0.36%(1/276)；HIV-1耐药突变位点及其耐药程度详见表1。
表1 抗病毒治疗前HIV-1耐药突变分析Tab.1 HIV-1 drug resistance mutations before antiviral therapyMutationCases(%)DR levelDrugsNRTI1(0.36) L74I1(0.36)IABCHDDINNRTI12(4.35) K103R,V179D5(1.81)LRPVIEFV,NVP E138G,V179E1(0.36)LEFV,NVP,ETR,RPV E138K,V179E1(0.36)LEFV,NVP,ETRIRPV E138EG1(0.36)LRPV P225H1(0.36)IDOR,EFV,NVP V106VIM1(0.36)IDORHEFV,NVP V106M,G190A1(0.36)LRPVIDORHEFV,NVP V108VI1(0.36)LDOR, NVPPI3(1.09) M46I2(0.72)INFV M46L1(0.36)LNFVNNRTI+PI1(0.36) V179D, M46LLNFV合计17(6.16)Note: L-Low-level resistance; H-High-level resistance; I-Intermediate resistance; DR, Drug resistance; PI，Protease inhibitor; NRTI, Nucleoside reverse transcriptase inhibitor; NNRTI, Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor; ABC, Abacavir; DDI, dideoxyinosine; RPV, Rilpivirine; EFV, Efavirenz; NVP, Nevirapine; ETR, Etravirine; DOR, Doravirine; NFV, Nelfinavir.
2.3耐药影响因素分析 针对性别、民族、婚姻、感染途径、年龄、文化程度、亚型6个变量进行耐药多因素Logistic回归分析(见表2)。 结果显示年龄(P<0.05)和亚型(P
文章来源：《河北科技图苑》 网址: http://www.hbkjty.cn/qikandaodu/2021/0328/633.html